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      血小板聚集儀 LBY-NJ 操作程序

      北京中西遠大科技有限公司2014年9月26日 9:44 點擊:1181

       一、儀器安裝與檢查
      1. 分別連接儀器與計算機的電源線,將儀器通訊電纜連接于計算機COM2端口,電纜另一頭插入儀器通訊口內。
      2. 啟動計算機系統,按提示完成軟件安裝。
      3. 接通聚集儀電源,打開電源開關。儀器液晶顯示窗顯示應齊全。
      4. 接通計算機系統電源,計算機系統進入WIN98/2000操作界面,在桌面菜單上選擇血小板聚集儀系統控制軟件(LBY-NJ)快捷鍵,雙擊,屏幕顯示該軟件工作主界面。
      二、準備工作
      1. 開機:開機在室溫條件下預熱30分鐘,使溫度升至37℃。
      2. 標本采集:抗凝劑用109mmol/l的枸櫞酸鈉,取血量與抗凝劑的比例為9:1,立即顛倒充分混勻。(忌用力振蕩,應使用塑料試管)
      ▲注意:枸櫞酸鈉要現用現配,用蒸餾水配制。
      3. 富含血小板血漿(PRP)制備:抗凝血標本用水平離心機500~800轉/分(當前離心機為2000轉/分),離心10分鐘,待離心機自然停止后取出標本,小心吸取上層富含血小板血漿。
      ▲注意:離心后的PRP中不應含有紅細胞,否則應再離心,應根據所用離心機調整合適的轉速及離心時間(以PRP得量占血樣1/3為佳)。PRP應無溶血。
      4. 乏血小板血漿(PPP)制備:將上述已吸取PRP的血再次離心。4000轉/分,離心10分鐘,待離心機自然停止后取出標本,小心吸取上層無血小板的血漿備用,血漿應清亮透明。測定后液晶屏顯示值最好不大于100。
      5. 富含血小板血漿(PRP)中血小板數量調整:計數PRP中血小板數量后,液晶屏上顯示的血小板相對濃度不大于510,如小于510則不用調整,若大于510時,測定結果受影響(調整公式為:C1V1=C2V2)。最佳狀態為顯示值在300-400之間。
      6. 血小板聚集誘導劑的準備:
      6.1 ADP:一般用ADP較多。ADP一般用生理鹽水配成3000μmol/l濃度,于-20℃以下小量分裝,低溫凍存。臨用前復溶,并用生理鹽水稀釋至300μmol/l備用。
      例如:ADP的分子量為427,精度稱取6.4mgADP,溶于5ml生理鹽水中。待完全溶解后,分裝于尖底小塑料管中,每管0.1ml,用時加0.9ml生理鹽水混勻,即為應用液。
      6.2 膠原:使用濃度為10%,腹部膠原效果好于尾部膠原,最好現用現制;冰浴中處理,盡量快,研磨時間要久(不短于半小時~1小時);離心后小針頭抽取,聚集率可達40%~50%。
      6.3 花生四烯酸(AA):使用濃度為200μmol/l ,用0.1MPBS配制,最好能用氮氣保護。
      ★備注:a 各誘導劑的使用量為5-10μl,可調節其用量使正常組最大聚集率控制在40%-50%。
      b 解凍后要在冰盒里放置,用時抽出。膠原要現用現配。
      二、操作步驟
      1. 在測定樣品方杯中加入一小磁棒和300μlPRP置恒溫孔中預熱5分鐘備用。在另一方杯中加入300μlPPP備用。
      2. 將儀器調至TEST狀態,在測試通道中插入PPP方杯,按確認鍵或相應的通道鍵儀器自動檢測零點,窗口顯示P25(舉例)該數值為PPP血漿中血小板的相對濃度,待數值穩定后按確認鍵或相應的通道鍵。
      3. 取出PPP方杯放入PRP方杯,當窗口顯示R256(舉例)時[該數值表示被測血漿中(PRP)血小板的相對濃度],待數值穩定后,按確認鍵或相應的通道鍵后窗口顯示ADP。
      4. 用微量進樣器吸取3μlADP加入杯底,按確認鍵或相應的通道鍵儀器進入測試血小板聚集狀態,窗口顯示計時時或血小板最大聚集率。
      5. 測試完畢后儀器自動打印出結果及相應曲線,一般只報告最大聚集率。
      ▲注意:測試時,為保持數值的一致性,請始終保持測試方杯的凸起面與儀器測試通道的黃色標記在同側。
      三、注意事項
      1. 微量進樣器加樣時必須插到杯底再加樣。
      2. 如做不出結果,可取出試杯用肉眼觀察是否有血小板聚集的微小團絡,試樣會變得比加ADP前清澈透明。否則說明血小板并未聚集,應檢查樣本制備和ADP有無問題。
      3. 樣本制備是關鍵,初次用離心機制備樣本時應與血球計數測量血小板數量的結果予以對比,選擇合適的離心轉速和時間。
      4. 進行測量時要保證室溫在22℃以上,以免樣品內形成膠胨狀物質而影響檢測結果。
      四、儀器的日常維護
      1. 電源電壓:(220±22)V,頻率(50±1)Hz。如當地電壓不穩定,應使用穩壓電源,不與大功率電器共線并用,應確保接地,避免干擾。
      2. 保持清潔,特別是測試孔內的清潔。使用后一定要擦干凈。避免陽光直曬,遠離強熱物體,防治受潮、腐蝕,遠離強電磁場干擾。

      (來源: 北京中西遠大科技有限公司


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